الکتروفورز ژل پلی آکریل آمید دو بعدی و یا 2D-PAGEروشی برای جداسازی مخلوط های پروتئینی پیچیده است. کوره ازمایشگاهی در نظر بگیرید یک نمونه مجهول با تعداد نامشخصی از تنوع های پروتئینی در اختیار دارد. برای شناسایی پروتئین های نمونه مجهول چاره ای جز استفاده از روش الکتروفورز دو بعدی نخواهید داشت. این روش جداسازی بسیار ساده و روتین است. تکنیک الکتروفورز دو بعدی به وسیله دو ویژگی مختلف پروتئین یعنی نقطه ایزوالکتریک و وزن مولکولی، طی دو مرحله صورت می گیرد.
بعد ها در این تکنیک الکتروفورز ژل دوبعدی پروتئین ها به دو مرحله و دو ویژگی فیزیکی و شیمیایی پروتئین ها اشاره دارند. در بعد اول، پروتئین ها براساس نقطه ایزوالکتریک و در بعد دوم براساس وزن مولکولی نسبی از یکدیگر جدا می شوند.
در الکتروفورز دو بعدی پروتئین ها، ابتدا جداسازی صرفا بر اساس بار الکتریکی در یک میدان الکتریکی انجام می شود. با توجه به این که با یکدیگر متفاوت است، این جداسازی اهمیت پیدا می کند. در مرحله دوم، پروتئین ها یک بار دیگر به وسیله الکتروفورز عمودی تفکیک می شوند، اما این بار بر اساس جرم!
در ادامه، جزییات انجام این روش و مراحل آن ها به صورت کامل بررسی شده اند.
پروتئین ها در مرحله isoelectric focusing (IEF) براساس نقطه ایزوالکترویک از یکدیگر جدا می شوند. نقطه ایزوالکتریک به عنوان pHای تعریف می شود که در آن بار خالص مولکول پروتئین صفر می باشد. در واقع براساس این تعریف اگر pH پروتئین کمتر از نقطه ایزوالکتریک باشد دارای بار مثبت و اگر بیشتر از نقطه ایزوالکتریک باشد دارای بار منفی است.
در این فرآیند مخلوط پروتئین تحت تاثیر میدان الکتریکی اعمال شده و بسته به بارها از هم جدا می شوند. درواقع پروتئین ها براساس بار خود به سمت قطبین حرکت می کنند. پروتئین ها تا رسیدن به pH معادل نقطه ایزوالکتریک خود به حرکت ادامه می دهند. سپس آن ها با رسیدن به آن نقطه متمرکز شده و از مخلوط جدا می شوند.
پس از جداسازی در بعد اول، جداسازی در بعد دوم به وسیله دستگاه با تکنیک SDS-PAGE و بر اساس وزن مولکولی پروتئین ها صورت می گیرد.
در این تکنیک پروتئین ها به وسیله SDSدناتوره می شوند و با استفاده از یک عامل کاهنده، مانند DTT پیوندهای دی سولفیدی شکسته و ساختار سوم پروتئین از بین می رود و به ساختاری خطی با بار منفی تبدیل می شود.
می توان با نشاندار کردن پروتئین ها به وسیله اسیدهای آمینه نشاندار مانند 3H، 14C یا 35S و رنگ آمیزی آن ها با استفاده از کوماسی بلو، رنگ نقره، رنگ های فلورسنت و یا از طریق تشخیص رادیو ایزوتوپ (فسفرسانس) پروتیئن های جدا شده را مشاهده کرد. با استفاده از تکنیک الکتروفورز دو بعدی و رنگ آمیزی که ذکر شد، پروتئین های مختلف را می توان جدا کرد. در نهایت اطلاعاتی مانند نقطه ایزوالکتریک، وزن مولکولی و مقدار پروتئین را با این روش تعیین می شود.
نامگذاری پروتئین ها به صورت باند براساس حرکت و جایگاه آن ها توسط دستگاه الکتروفورز و به روش SDS-PAGE که مخفف Polyacrylamide gel electrophoresis Sodium dodecyl است انجام می شود. در این تکنیک پروتئین ها الکتروفورز شده و براساس اندازه در ژل قرار می گیرند. این نوع تکنیک به دلیل نوع ژل مورد نیاز که پلی آکریل آمید است با دستگاه الکتروفورز عمودی انجام می شود.
بار الکتریکی و اندازه مولکول ها در جداسازی پروتئین ها به وسیله تکنیک الکتروفورز حائز اهمیت هستند. اگر با تکنیکی بتوانیم بار همه مولکول های پروتئین را یکسان کنیم در این حالت جداسازی تنها براساس اندازه مولکول انجام می گیرد. با این روش فرآیند با دقت بالاتری نسبت به قبل انجام می شود.
در این روش با استفاده از حرارت دادن و اتصال دترجنت آنیونی به نام دودسیل سولفات SDS که لوریل سولفات نیز نامیده می شود (SDS) به پروتئین ها، بار همه مولکول های پروتئینی منفی می شود. ترکیب SDS به نواحی آبگریز پروتئین ها متصل شده و آن ها را دناتوره می کند. با این کار، در واقع SDS بار الکتریکی مولکول های پروتئین را می پوشاند و به این ترتیب، سرعت حرکت پروتئین ها تنها به اندازه آن ها بستگی دارد، نه به بار آن ها. بعد از این مرحله، با استفاده از بستر پلی آکریل آمید، پروتئین ها در طول ماتریکس ژل براساس اندازه شان از هم جدا می شوند.
در تکنیک SDS-PAGE هر پروتئینی که وزنش کمتر باشد راحت تر از منافذ ژل عبور کرده و حرکت بیشتری در ژل خواهد داشت. در انتها هم پس از اتمام ژل، برای ظهور و پیدا شدن باند های پروتئین، رنگ آمیزی ژل اغلب با رنگ کوماسی بلو انجام می شود.
اختراع واکنش زنجیره ای پلیمراز (PCR) زمینه ای را برای پیشرفت در تحقیقات زیست پزشکی به وجود آورد و به دلیل کاربرد های متعدد به ابزاری حیاتی برای محققان و متخصصان بالینی تبدیل شد. ساخت و نصب سکوبندی ازمایشگاهی یک واکنش موثر PCR نیازمند دانش کافی از هر جزء واکنش و آگاهی از روش گام به گام برای دستیابی به نتایج بهینه است. بنابراین بهینه سازی PCR بخشی از مراحل انجام این آزمایش است و به صورت مستقیم می تواند بر نتایج به دست آمده تاثیر بگذارد.
واکنش زنجیرهای پلیمراز (PCR) یک تکنیک بیولوژی مولکولی است که برای تولید نسخه های متعدد از یک قطعه DNA خاص استفاده می شود. این روش برای اولین بار توسط کری مولیس در سال 1985 نشان داده شد اما فرآیند اولیه توسط Kleppe و همکاران توصیف شد.
PCR کاربردهای متعددی دارد و به طور گسترده در تحقیقات زیست پزشکی، پزشکی قانونی، انگشت نگاری DNA، توالی یابی DNA، تجزیه و تحلیل ژنتیکی، شبیه سازی مولکولی، تشخیص مولکولی و غیره استفاده می شود.
شامل سه بخش است:
با در نظر گرفتن اجزای مختلف واکنش مورد نیاز برای راه اندازی موفق PCR بهینه، پارامتر های زیر باید ابتدا قبل از شروع آزمایش PCR، برای دستیابی به نتایج بهینه مورد توجه قرار گیرند.
بهینه سازی PCR نیازمند تعادل ظریف بین بالا بردن تولید محصولات خاص و اجتناب از تولید محصولات غیر اختصاصی و فرعی است. در یک مطالعه که نتایج آن نیز در یکی از مطرح ترین ژورنال ها به چاپ رسیده است، پارامتر های که بر کارایی و ویژگی تکثیر DNA تأثیر میگذارند، مورد ارزیابی قرار گرفته اند. جمع بندی نتایج این مطالعه را در ادامه آورده شده است.
پارامترهای ارزیابی شده عبارتند از: دمای دناتوراسیون، آنالینگ و گسترش، تعداد چرخه های انجام شده، و غلظت های پرایمر، کلرید منیزیم، dNTP، Taq DNA پلیمراز و الگوی DNA. البته لازم به توضیح است که اهمیت غلظت DNA به منبعی که DNA از آن استخراج شده است بستگی دارد.
در ادامه 4 مورد از مهم ترین پارامتر های بهینه سازی PCR معرفی و درباره نقش هر کدام فرایند واکنش بحث شده است.
پرایمرها رشته های کوتاهی از توالی های DNA هستند که برای شروع PCR مورد نیاز هستند. تکثیر توالی های DNA هدفمند نیاز به یک نقطه شروع برای مرحله افزایش طول واکنش دارند. برای انجام موفقیت آمیز هر PCR، باید مجموعه ای از پرایمر های مناسب آن طراحی شود.
دئوکسی ریبونوکلئوزید های 5′- تری فسفات (dNTPs) به عنوان یک سوبسترا برای DNA پلیمراز دخیل در تقویت توالی های DNA هدف عمل می کنند. dNTP ها ممکن است در یک مخلوط همگن باشند یا به طور جداگانه ارائه شوند و غلظت آن ها بین 20 میلی مولار تا 200 میلی مولار باشد. dNTP ها باید به مقدار مساوی اضافه شوند. در غیر این صورت، وجود یک dNTP در نسبت بالاتر ممکن است منجر به ادغام باز اشتباه در رشته DNA تازه سنتز شده شود. برای بهینه سازی PCR، غلظت dNTPs باید متناسب با غلظت MgCl2 افزایش یابد.
آنزیم پلیمراز مهم ترین جزء آزمایش PCR است. Taq DNA پلیمراز در تقویت DNA الگو نقش دارد. این آنزیم dNTP ها را در طول طویل شدن در رشته DNA تازه سنتز شده ترکیب می کند. هنگام افزایش غلظت پلیمراز برای دستیابی به بهینه سازی باید مراقب بود، زیرا ممکن است به دلیل تقویت غیر اختصاصی DNA پلیمراز منجر به تشکیل لکه شود.
منیزیم کلراید به عنوان یک عامل کمکی برای طویل شدن قالب انجام شده توسط Taq DNA پلیمراز عمل می کند. اکثر آزمایش های نا موفق PCR را می توان با تغییر غلظت MgCl2 در مخلوط واکنش بهینه کرد و بهترین نتایج را به دست آورد. MgCl2 همچنین با سایر اجزای مخلوط واکنش مانند الگوی DNA، dNTPs در تعامل است. همچنین ممکن است منیزم کلراید ضمن افزایش پایداری DNA، دمای ذوب را افزایش دهد. غلظت پایین یون مثبت در محلول ممکن است واکنش PCR را با شکست مواجه کند یا منجر به تقویت ناقص شود. در حالی که غلظت بالای یون منیزیم ممکن است منجر به پایداری رشته DNA شود و از آنالینگ پرایمرها به یک الگو جلوگیری کند و منجر به شکست واکنش یا تکثیر محصولات غیر اختصاصی شود.
انجام عملیات دریافت رتبه بندی صلاحیت پیمانکاران و مشاوران، شامل اخذ، ثبت شرکت تمدید و ارتقاء آن از قسمت مربوطه معاونت محترم نظارت راهبردی ریاست جمهوری به صورت الکترونیکی با توجه به مستندات اطلاعات وارد شده در سامانه ساجات انجام می شود.
بدیهی است در صورت عدم مطابقت مستندات با اطلاعات وارد شده در پرونده شرکت، امتیاز آن قرارداد برای شرکت لحاظ نخواهد شد. صحت مدارک ارائه شده از طرف متقاضی توسط کمیته استعلام می گردد.
مدارک اعضای هیات مدیره و سهامداران:
مدارک شرکت:
متقاضی باید فرم تقاضای رتبه بندی خود را تکمیل و پس از فراهم نمودن مدارک ذکر شده، به سامانه ی ساجات مراجعه و درخواست خود را اعلام نماید. بدین منظور می بایست در مرحله اول ثبت نام،شناسه و گذر واژه اول را دریافت کند و اطلاعات اولیه شرکت را در سامانه درج نماید. سپس اطلاعات وارد شده توسط کارشناس مربوطه مورد بررسی قرار می گیرد و در صورت تایید معاونت راهبردی و دریافت شناسه و گذر واژه دوم، در مرحله ی بعدی سایر اطلاعات شرکت با توجه به رشته و پایه درخواستی در سامانه درج می گردد و مدارک درخواست شده درسامانه بارگذاری شده و در محل های مربوطه الصاق می گردد.سپس پرونده جهت بررسی به سازمان مربوطه ارسال می گردد. سازمان مربوطه پس از بررسی پرونده و تایید آن پرونده الکترونیکی شرکت را به استانداری ارسال می نماید. سپس تمامی مدارک بطور حضوری توسط استانداری دریافت می گردد تا نسبت به صدور کارتکس شرکت اقدام گردد.
به موجب ماده 25 آیین نامه طبقه بندی و تشخیص صلاحیت پیمانکاران، در صورتی که اطلاعات تنظیم شده برای تشخیص صلاحیت نادرست و یا اسناد ارائه شده تقلبی و جعلی باشد، شرکت و مدیران آن به تشخیص دفتر امور مشاوران و پیمانکاران یا سازمان های مدیریت و برنامه ریزی استان ها از یک تا سه سال از تشخیص صلاحیت محروم می گردند.
الف-مدیر کل دفتر امور مشاوران و پیمانکاران سازمان(رییس کمیته)
ب-مدیر کل دفتر نظارت و ارزیابی طرح های سازمان
ج-یک نفر کارشناس مستقل واجد صلاحیت های فنی و حقوقی،به تشخیص و انتخاب معاون امور فنی سازمان
د-نماینده انجمن صنفی پیمانکاری ذیربط
تصمیمات این کمیته با اکثریت آراء تصویب می شود. لذا هر گونه اشتباه سهوی در وارد نمودن اطلاعات در سامانه ساجات از جمله عدم مهارت کافی در رابطه با نحوه ی محاسبه امتیازات بخش های مختلف، موجب طولانی تر شدن مراحل اخذ، تمدید و ارتقاء رتبه بندی و حتی تنزل رتبه های گرفته شده ی قبلی برای دریافت پیمانکاران و مشاوران می گردد.
https://danasabt.ir/%D9%BE%D9%84%D9%85%D9%BE-%D8%AF%D9%81%D8%A7%D8%AA%D8%B1/
با توجه به امکانات ایجاد شده در سامانه ی جامع ساجات، پیگیری پرونده صرفاَ از طریق سامانه امکان پذیر است و حضور نماینده ی شرکت در محل تشخیص صلاحیت ضرورت ندارد.در موارد ضروری از مدیر عامل و یا یکی از اعضای هیات مدیره شرکت دعوت به عمل می آید.
وفق ماده ی 21 آیین نامه اجرایی قانون ثبت اختراعات،انتقال حق مالکیت ناشی از تسلیم اظهارنامه یا اعطاء هر گونه اجازه بهره برداری از آن باید حسب مورد به درخواست کتبی منتقل الیه یا مالک اختراع به مرجع ثبت اعلام و در پرونده مربوط درج گردد. پلمپ دفاتر اعمال این تغییر منوط به پرداخت هزینه خواهد بود.
چنانچه متقاضی بخواهد اصلاحاتی را در مورد توصیف،خلاصه توصیف اختراع یا نقشه ها انجام دهد باید صفحاتی از ضمائم که این اصلاحات مربوط به آن ها است را دوباره تایپ کند،به نحوی که کل آن ها یک سند یکپارچه را تشکیل دهد.اضافه کردن بین خطوط،چسباندن،حاشیه نویسی،یا اصلاح به صورت زیرنویس و اقداماتی از این قبیل ممنوع است.
متقاضی به موجب ماده 23،می تواند تا قبل از ثبت اختراع،اظهارنامه خود را اصلاح کند،مشروط بر اینکه از حدود اظهارنامه نخست تجاوز ننماید.درخواست اصلاح با پرداخت هزینه مقرر در جدول هزینه ها انجام می پذیرد.
اظهارنامه ی اختراع ممکن است با درخواست کتبی متقاضی مسترد گردد.در صورت تعدد متقاضیان،این درخواست باید به امضای همه آن ها رسیده و متضمن عنوان اختراع،شماره و تاریخ اظهارنامه باشد.در صورت استرداد اظهارنامه،هزینه های پرداختی مسترد نخواهد شد.چنانچه،اظهارنامه مسترد شده مبنای اظهارنامه های تقسیم شده ی دیگری قرار گرفته باشد،اظهارنامه های بعدی هم مسترد شده تلقی می گردد.
توسعه یا بهبود یک اختراع می تواند موضوع اظهارنامه تکمیلی نیز قرار گیرد،مشروط بر اینکه مکمل و مبین همان اختراعی باشد که در اظهارنامه اصلی ادعا شده است.در این صورت:
1-شماره و تاریخ اظهارنامه اصلی در اظهارنامه تکمیلی ذکر می گردد.
2-تکمیلی بودن اختراع در قسمت توصیف بعد از عنوان درج می شود.
3-اعطای گواهی نامه اختراع به اظهارنامه تکمیلی مشروط به اعطای گواهی نامه اختراع به اظهارنامه ی اصلی است.
4-در صورت ثبت اختراع اصلی،آگهی ثبت اختراع تکمیلی متضمن شماره و تاریخ ثبت اظهارنامه اصلی است.
در صورت رد اظهارنامه تکمیلی در مهلتی که برای اعتراض به رد وجود دارد،متقاضی می تواند اظهارنامه خود را به طور مستقل ارائه دهد،مشروط بر آنکه مفهوم اختراعی آن با اظهارنامه اصلی یکسان نباشد در این صورت،شماره ای جدید به اظهارنامه مستقل داده می شود و از همان تاریخ اظهارنامه تکمیلی حق تقدم خواهد داشت.
صدور گواهی نامه ی اختراع تکمیلی تابع همان مقرراتی خواهد بود که برای گواهی نامه اصلی تعیین شده است ولی مدت اعتبار گواهی نامه تکمیلی نمی تواند از مدت اعتبار گواهی نامه اصلی تجاوز نماید.
ادعای اختراع باید عناصر اختراعی را که حمایت از آن درخواست شده است،در چارچوب مشخصه های فنی تعیین کند.هر اختراع می تواند مشتمل بر یک یا چند ادعا باشد.ادعا یا ادعاها باید صریح و منجز بوده و دارای شرایط ذیل باشند:
1-معقول بودن تعداد آن ها با توجه به ماهیت اختراع و شماره گذاری ترتیبی آن ها در صورت تعدد.
2-از اطلاعات افشاء شده در توصیف اختراع فراتر نرود و به طور کامل در توصیف اثبات و مدلل شده باشد.
3-ویژگی های فنی قابل حمایت را با استفاده از جملات مثبت،بیان نماید.
4-جز در موارد غیر قابل اجتناب،از ارجاع به نقشه ها یا توصیف امتناع گردد و تا حد ممکن از به کار بردن عباراتی مانند " همان طور که در توصیف آمد " یا " همان طور که در نقشه ها نشان داده شده " خودداری شود.
5-در صورتی که برای فهم ادعا ارجاع به نقشه ضرورت داشته باشد،پس از بیان ادعا،شماره صفحه نقشه و علامت مشخص کننده ی آن در داخل پرانتز ذکر گردد.
6-مشتمل بر شیوه اجرا و مزایای اختراع نباشد.
پس از احراز شرایط مقرر ذکر شده،آن را در دفتر ثبت وارد و بر روی هر یک از نسخ اظهارنامه،تاریخ دریافت اظهارنامه و شماره آن را قید نموده و نسخه دوم آن را همراه با ضمائم،که دارای همان مشخصات نسخه اصلی است،بعد از امضاء و مهر و قید تاریخ(ساعت،روز،ماه،سال) وصول آن با تمام حروف،به عنوان رسید به متقاضی مسترد خواهد کرد.