اختراع واکنش زنجیره ای پلیمراز (PCR) زمینه ای را برای پیشرفت در تحقیقات زیست پزشکی به وجود آورد و به دلیل کاربرد های متعدد به ابزاری حیاتی برای محققان و متخصصان بالینی تبدیل شد. ساخت و نصب سکوبندی ازمایشگاهی یک واکنش موثر PCR نیازمند دانش کافی از هر جزء واکنش و آگاهی از روش گام به گام برای دستیابی به نتایج بهینه است. بنابراین بهینه سازی PCR بخشی از مراحل انجام این آزمایش است و به صورت مستقیم می تواند بر نتایج به دست آمده تاثیر بگذارد.
واکنش زنجیره‌ای پلیمراز (PCR) یک تکنیک بیولوژی مولکولی است که برای تولید نسخه های متعدد از یک قطعه DNA خاص استفاده می شود. این روش برای اولین بار توسط کری مولیس در سال 1985 نشان داده شد اما فرآیند اولیه توسط Kleppe و همکاران توصیف شد.
PCR کاربردهای متعددی دارد و به طور گسترده در تحقیقات زیست پزشکی، پزشکی قانونی، انگشت نگاری DNA، توالی یابی DNA، تجزیه و تحلیل ژنتیکی، شبیه سازی مولکولی، تشخیص مولکولی و غیره استفاده می شود.
شامل سه بخش است:
با در نظر گرفتن اجزای مختلف واکنش مورد نیاز برای راه اندازی موفق PCR بهینه، پارامتر های زیر باید ابتدا قبل از شروع آزمایش PCR، برای دستیابی به نتایج بهینه مورد توجه قرار گیرند.
بهینه سازی PCR نیازمند تعادل ظریف بین بالا بردن تولید محصولات خاص و اجتناب از تولید محصولات غیر اختصاصی و فرعی است. در یک مطالعه که نتایج آن نیز در یکی از مطرح ترین ژورنال ها به چاپ رسیده است، پارامتر های که بر کارایی و ویژگی تکثیر DNA تأثیر می‌گذارند، مورد ارزیابی قرار گرفته اند. جمع بندی نتایج این مطالعه را در ادامه آورده شده است.
پارامترهای ارزیابی شده عبارتند از: دمای دناتوراسیون، آنالینگ و گسترش، تعداد چرخه های انجام شده، و غلظت های پرایمر، کلرید منیزیم، dNTP، Taq DNA پلیمراز و الگوی DNA. البته لازم به توضیح است که اهمیت غلظت DNA به منبعی که DNA از آن استخراج شده است بستگی دارد.
در ادامه 4 مورد از مهم ترین پارامتر های بهینه سازی PCR معرفی و درباره نقش هر کدام فرایند واکنش بحث شده است.
پرایمرها رشته های کوتاهی از توالی های DNA هستند که برای شروع PCR مورد نیاز هستند. تکثیر توالی های DNA هدفمند نیاز به یک نقطه شروع برای مرحله افزایش طول واکنش دارند. برای انجام موفقیت آمیز هر PCR، باید مجموعه ای از پرایمر های مناسب آن طراحی شود.
دئوکسی ریبونوکلئوزید های 5′- تری فسفات (dNTPs) به عنوان یک سوبسترا برای DNA پلیمراز دخیل در تقویت توالی های DNA هدف عمل می کنند. dNTP ها ممکن است در یک مخلوط همگن باشند یا به طور جداگانه ارائه شوند و غلظت آن ها بین 20 میلی مولار تا 200 میلی مولار باشد. dNTP ها باید به مقدار مساوی اضافه شوند. در غیر این صورت، وجود یک dNTP در نسبت بالاتر ممکن است منجر به ادغام باز اشتباه در رشته DNA تازه سنتز شده شود. برای بهینه سازی PCR، غلظت dNTPs باید متناسب با غلظت MgCl2 افزایش یابد.
آنزیم پلیمراز مهم ترین جزء آزمایش PCR است. Taq DNA پلیمراز در تقویت DNA الگو نقش دارد. این آنزیم dNTP ها را در طول طویل شدن در رشته DNA تازه سنتز شده ترکیب می کند. هنگام افزایش غلظت پلیمراز برای دستیابی به بهینه سازی باید مراقب بود، زیرا ممکن است به دلیل تقویت غیر اختصاصی DNA پلیمراز منجر به تشکیل لکه شود.
منیزیم کلراید به عنوان یک عامل کمکی برای طویل شدن قالب انجام شده توسط Taq DNA پلیمراز عمل می کند. اکثر آزمایش های نا موفق PCR را می توان با تغییر غلظت MgCl2 در مخلوط واکنش بهینه کرد و بهترین نتایج را به دست آورد. MgCl2 همچنین با سایر اجزای مخلوط واکنش مانند الگوی DNA، dNTPs در تعامل است. همچنین ممکن است منیزم کلراید ضمن افزایش پایداری DNA، دمای ذوب را افزایش دهد. غلظت پایین یون مثبت در محلول ممکن است واکنش PCR را با شکست مواجه کند یا منجر به تقویت ناقص شود. در حالی که غلظت بالای یون منیزیم ممکن است منجر به پایداری رشته DNA شود و از آنالینگ پرایمرها به یک الگو جلوگیری کند و منجر به شکست واکنش یا تکثیر محصولات غیر اختصاصی شود.
انجام عملیات دریافت رتبه بندی صلاحیت پیمانکاران و مشاوران، شامل اخذ، ثبت شرکت تمدید و ارتقاء آن از قسمت مربوطه معاونت محترم نظارت راهبردی ریاست جمهوری به صورت الکترونیکی با توجه به مستندات اطلاعات وارد شده در سامانه ساجات انجام می شود.
بدیهی است در صورت عدم مطابقت مستندات با اطلاعات وارد شده در پرونده شرکت، امتیاز آن قرارداد برای شرکت لحاظ نخواهد شد. صحت مدارک ارائه شده از طرف متقاضی توسط کمیته استعلام می گردد.
مدارک اعضای هیات مدیره و سهامداران:
مدارک شرکت:
متقاضی باید فرم تقاضای رتبه بندی خود را تکمیل و پس از فراهم نمودن مدارک ذکر شده، به سامانه ی ساجات مراجعه و درخواست خود را اعلام نماید. بدین منظور می بایست در مرحله اول ثبت نام،شناسه و گذر واژه اول را دریافت کند و اطلاعات اولیه شرکت را در سامانه درج نماید. سپس اطلاعات وارد شده توسط کارشناس مربوطه مورد بررسی قرار می گیرد و در صورت تایید معاونت راهبردی و دریافت شناسه و گذر واژه دوم، در مرحله ی بعدی سایر اطلاعات شرکت با توجه به رشته و پایه درخواستی در سامانه درج می گردد و مدارک درخواست شده درسامانه بارگذاری شده و در محل های مربوطه الصاق می گردد.سپس پرونده جهت بررسی به سازمان مربوطه ارسال می گردد. سازمان مربوطه پس از بررسی پرونده و تایید آن پرونده الکترونیکی شرکت را به استانداری ارسال می نماید. سپس تمامی مدارک بطور حضوری توسط استانداری دریافت می گردد تا نسبت به صدور کارتکس شرکت اقدام گردد.
به موجب ماده 25 آیین نامه طبقه بندی و تشخیص صلاحیت پیمانکاران، در صورتی که اطلاعات تنظیم شده برای تشخیص صلاحیت نادرست و یا اسناد ارائه شده تقلبی و جعلی باشد، شرکت و مدیران آن به تشخیص دفتر امور مشاوران و پیمانکاران یا سازمان های مدیریت و برنامه ریزی استان ها از یک تا سه سال از تشخیص صلاحیت محروم می گردند.
الف-مدیر کل دفتر امور مشاوران و پیمانکاران سازمان(رییس کمیته)
ب-مدیر کل دفتر نظارت و ارزیابی طرح های سازمان
ج-یک نفر کارشناس مستقل واجد صلاحیت های فنی و حقوقی،به تشخیص و انتخاب معاون امور فنی سازمان
د-نماینده انجمن صنفی پیمانکاری ذیربط
تصمیمات این کمیته با اکثریت آراء تصویب می شود. لذا هر گونه اشتباه سهوی در وارد نمودن اطلاعات در سامانه ساجات از جمله عدم مهارت کافی در رابطه با نحوه ی محاسبه امتیازات بخش های مختلف، موجب طولانی تر شدن مراحل اخذ، تمدید و ارتقاء رتبه بندی و حتی تنزل رتبه های گرفته شده ی قبلی برای دریافت پیمانکاران و مشاوران می گردد.
https://danasabt.ir/%D9%BE%D9%84%D9%85%D9%BE-%D8%AF%D9%81%D8%A7%D8%AA%D8%B1/
با توجه به امکانات ایجاد شده در سامانه ی جامع ساجات، پیگیری پرونده صرفاَ از طریق سامانه امکان پذیر است و حضور نماینده ی شرکت در محل تشخیص صلاحیت ضرورت ندارد.در موارد ضروری از مدیر عامل و یا یکی از اعضای هیات مدیره شرکت دعوت به عمل می آید.
وفق ماده ی 21 آیین نامه اجرایی قانون ثبت اختراعات،انتقال حق مالکیت ناشی از تسلیم اظهارنامه یا اعطاء هر گونه اجازه بهره برداری از آن باید حسب مورد به درخواست کتبی منتقل الیه یا مالک اختراع به مرجع ثبت اعلام و در پرونده مربوط درج گردد. پلمپ دفاتر اعمال این تغییر منوط به پرداخت هزینه خواهد بود.
چنانچه متقاضی بخواهد اصلاحاتی را در مورد توصیف،خلاصه توصیف اختراع یا نقشه ها انجام دهد باید صفحاتی از ضمائم که این اصلاحات مربوط به آن ها است را دوباره تایپ کند،به نحوی که کل آن ها یک سند یکپارچه را تشکیل دهد.اضافه کردن بین خطوط،چسباندن،حاشیه نویسی،یا اصلاح به صورت زیرنویس و اقداماتی از این قبیل ممنوع است.
متقاضی به موجب ماده 23،می تواند تا قبل از ثبت اختراع،اظهارنامه خود را اصلاح کند،مشروط بر اینکه از حدود اظهارنامه نخست تجاوز ننماید.درخواست اصلاح با پرداخت هزینه مقرر در جدول هزینه ها انجام می پذیرد.
اظهارنامه ی اختراع ممکن است با درخواست کتبی متقاضی مسترد گردد.در صورت تعدد متقاضیان،این درخواست باید به امضای همه آن ها رسیده و متضمن عنوان اختراع،شماره و تاریخ اظهارنامه باشد.در صورت استرداد اظهارنامه،هزینه های پرداختی مسترد نخواهد شد.چنانچه،اظهارنامه مسترد شده مبنای اظهارنامه های تقسیم شده ی دیگری قرار گرفته باشد،اظهارنامه های بعدی هم مسترد شده تلقی می گردد.
توسعه یا بهبود یک اختراع می تواند موضوع اظهارنامه تکمیلی نیز قرار گیرد،مشروط بر اینکه مکمل و مبین همان اختراعی باشد که در اظهارنامه اصلی ادعا شده است.در این صورت:
1-شماره و تاریخ اظهارنامه اصلی در اظهارنامه تکمیلی ذکر می گردد.
2-تکمیلی بودن اختراع در قسمت توصیف بعد از عنوان درج می شود.
3-اعطای گواهی نامه اختراع به اظهارنامه تکمیلی مشروط به اعطای گواهی نامه اختراع به اظهارنامه ی اصلی است.
4-در صورت ثبت اختراع اصلی،آگهی ثبت اختراع تکمیلی متضمن شماره و تاریخ ثبت اظهارنامه اصلی است.
در صورت رد اظهارنامه تکمیلی در مهلتی که برای اعتراض به رد وجود دارد،متقاضی می تواند اظهارنامه خود را به طور مستقل ارائه دهد،مشروط بر آنکه مفهوم اختراعی آن با اظهارنامه اصلی یکسان نباشد در این صورت،شماره ای جدید به اظهارنامه مستقل داده می شود و از همان تاریخ اظهارنامه تکمیلی حق تقدم خواهد داشت.
صدور گواهی نامه ی اختراع تکمیلی تابع همان مقرراتی خواهد بود که برای گواهی نامه اصلی تعیین شده است ولی مدت اعتبار گواهی نامه تکمیلی نمی تواند از مدت اعتبار گواهی نامه اصلی تجاوز نماید.
ادعای اختراع باید عناصر اختراعی را که حمایت از آن درخواست شده است،در چارچوب مشخصه های فنی تعیین کند.هر اختراع می تواند مشتمل بر یک یا چند ادعا باشد.ادعا یا ادعاها باید صریح و منجز بوده و دارای شرایط ذیل باشند:
1-معقول بودن تعداد آن ها با توجه به ماهیت اختراع و شماره گذاری ترتیبی آن ها در صورت تعدد.
2-از اطلاعات افشاء شده در توصیف اختراع فراتر نرود و به طور کامل در توصیف اثبات و مدلل شده باشد.
3-ویژگی های فنی قابل حمایت را با استفاده از جملات مثبت،بیان نماید.
4-جز در موارد غیر قابل اجتناب،از ارجاع به نقشه ها یا توصیف امتناع گردد و تا حد ممکن از به کار بردن عباراتی مانند " همان طور که در توصیف آمد " یا " همان طور که در نقشه ها نشان داده شده " خودداری شود.
5-در صورتی که برای فهم ادعا ارجاع به نقشه ضرورت داشته باشد،پس از بیان ادعا،شماره صفحه نقشه و علامت مشخص کننده ی آن در داخل پرانتز ذکر گردد.
6-مشتمل بر شیوه اجرا و مزایای اختراع نباشد.
پس از احراز شرایط مقرر ذکر شده،آن را در دفتر ثبت وارد و بر روی هر یک از نسخ اظهارنامه،تاریخ دریافت اظهارنامه و شماره آن را قید نموده و نسخه دوم آن را همراه با ضمائم،که دارای همان مشخصات نسخه اصلی است،بعد از امضاء و مهر و قید تاریخ(ساعت،روز،ماه،سال) وصول آن با تمام حروف،به عنوان رسید به متقاضی مسترد خواهد کرد.
در محیط‌های آزمایشگاهی، همزن آزمایشگاهی به عنوان یک تجهیز عمومی شناخته می‌شود که به کاربران این امکان را می‌دهد به راحتی محلول‌ها را مخلوط نمایند. قیمت هودشیمیایی ازمایشگاهی این دستگاه با استفاده از حرکت‌های مغناطیسی، مایعات را به‌طور یکنواخت مخلوط می‌کند و گاهاً حتی قابلیت اعمال حرارت به آنها را دارد. همزن آزمایشگاهی در اکثر واکنش‌های شیمیایی و آزمایشات مرتبط با زیست‌شناسی و تشخیص طبی استفاده گسترده‌ای دارد.
استفاده از همزن آزمایشگاهی به دلیل عدم نیاز به دست برای انجام فرآیند مخلوط‌سازی و هم‌زنی، این فرآیند را بسیار ساده‌تر و بهینه‌تر می‌کند. این تجهیزات با قابلیت تنظیم سرعت چرخش و حرکت یکنواخت، عملیات آزمایشی را بهبود بخشیده و به تسریع اجرای واکنش‌ها کمک می‌نماید.
همچنین، با توجه به توانایی همزن آزمایشگاهی در افزایش تسریع واکنش‌ها، این تجهیز در بسیاری از آزمایشگاه‌ها جزء تجهیزات ضروری محسوب می‌شود. به‌علت کارآیی بالا و سادگی استفاده، توصیه می‌شود که این تجهیزات در همه آزمایشگاه‌های شیمیایی و زیست‌شناسی حضور داشته باشند.
اجزای همزن مغناطیسی یک دستگاه پیچیده و کارآمد را شامل می‌شوند:
• موتور مغناطیسی: این قسمت از دستگاه به وسیله آهنربا نیروی حرکت ایجاد می‌کند که سپس به مگنت دستگاه منتقل می‌شود.
• صفحه هات پلیت: این قسمت برای قرار دادن ظرف حاوی محلول بر روی آن استفاده می‌شود و در تعامل با مگنت دستگاه قرار می‌گیرد.
• کلید و صفحه کنترل: این بخش از دستگاه برای تنظیم سرعت چرخش مگنت دستگاه به کار می‌رود و امکان کنترل دقیق تر فرآیند مخلوط‌سازی را فراهم می‌کند.
• مگنت یا آهنربا: این اجزاء با شکل قرصی یا بیضی شکل و با روکشی مقاوم در برابر مواد شیمیایی ساخته شده‌اند. وقتی آهنربای دستگاه چرخش می‌کند، مگنت داخل ظرف محلول نیز حرکت می‌کند و این باعث تنظیم و کنترل آسان دما و سرعت چرخش مگنت در ظرف محلول می‌شود. این اجزا همگی با هم هماهنگی داخلی مناسبی دارند و عملکرد بهینه همزن مغناطیسی را فراهم می‌کنند.
همزن‌ها، با وجود ساختار و عملکرد مشترک، به دو دسته اصلی همزن دستی و همزن رومیزی تقسیم می‌شوند، که هرکدام کاربردها و ویژگی‌های خود را دارند. همزن دستی به دلیل قابل حمل بودن و استفاده آسان، برای مواقعی که نیاز به حرکت و زاویه‌های مختلف دستگاه می‌باشد، مناسب است.
از سوی دیگر، همزن رومیزی که به دلیل ثابت بودن و قرار گرفتن روی میز یا سطح ثابتی، برای وظایفی که نیاز به پایداری دستگاه است، انتخاب می‌شود.
امروزه با پیشرفت تکنولوژی، امکان استفاده از وسایل همیشه و در هر مکانی ایجاد شده است. با این حال، مصرف هوشمندانه و خلاقانه متریال‌های محیطی، افراد را قادر می‌سازد تا با هزینه کمتر و با استفاده از ابزارهای موجود، محصولات کاربردی و موثری را خلق کنند. این نگاه خلاقانه به ساخت محصولات خود باعث جلوگیری از هدررفت منابع مالی می‌شود و افراد را به بهره‌مندی از امکانات موجود تشویق می‌کند.
ساخت آن یک فرآیند پیچیده و متخصصانه است که از مواد مرغوب و تکنولوژی پیشرفته برخوردار است. ابتدا، برای ساخت اجزای اصلی همزن مغناطیسی، از مواد مقاوم به مواد شیمیایی نظیر استیل ضدزنگ استفاده می‌شود. سپس، یک موتور مغناطیسی با کیفیت برای ایجاد نیروی حرکت در دستگاه اضافه می‌شود.
صفحه هات‌پلیت به عنوان قسمت مرکزی برای قرار گرفتن ظرف محلول انتخاب می‌شود و مگنتی با روکش مقاوم در برابر مواد شیمیایی نیز برای ایجاد حرکت درون ظرف استفاده می‌شود. در نهایت، یک کلید و صفحه کنترل برای تنظیم سرعت چرخش مگنت دستگاه به دستگاه افزوده می‌شود. این فرآیند تولید، با کنترل دقیق و مواد با کیفیت، همزن مغناطیسی با کارایی و قابلیت انجام وظایف متنوع و دقیق را فراهم می‌کند.
سخن آخر
در نهایت، به عنوان یک وسیله حیاتی در آزمایشگاه‌ها و صنایع مختلف از اهمیت ویژه‌ای برخوردار است. این دستگاه با ساختار ساده و عملکرد کاربردی خود، به دستگاه کاربردی برای مخلوط کردن مواد مایع در آزمایشگاه‌ها تبدیل شده است. از آنجایی که همزن مغناطیسی به راحتی قابل تنظیم در سرعت چرخش و دمای محیط می‌باشد، در انجام واکنش‌های شیمیایی و بیولوژیکی بسیار کمک‌کننده است.
با توجه به اهمیت این وسیله در فرآیندهای آزمایشگاهی، ساخت آن با کیفیت و استاندارد، تضمین‌کننده‌ی عملکرد بهینه و دقت در آزمایشات مختلف می‌شود.