کوره دندانسازی

کوره دندانسازی برای بازسازی و ترمیم دندان در فعالیت هایی نظیر روکش ، هود لامینار  بریج ، اینله و آنله مورد استفاده قرار می گیرد. کوره های دندانسازی می توانند به دما ها و فشار های بالا برسند تا مواد سرامیکی را به حالت سخت شده و نهایی تبدیل کنند. بسیاری از کوره های دندانسازی مدرن دارای کنترل های صفحه لمسی، برنامه های از پیش تنظیم شده و حتی قابلیت اتصال به اینترنت هستند. هنگام خرید کوره برای مطب یا آزمایشگاه دندانپزشکی، مهم است که مطمئن شوید که کوره قادر به پردازش موادی است که قصد دارید با آن ها کار کنید.


انواع کوره های دندانسازی

کوره های دندانسازی از دما و فشار بالا برای پردازش مواد سرامیکی و ساخت شکل نهایی دندان یا روکش استفاده می کنند. این کوره ها به چند دسته تقسیم می شوند که شامل کوره های پخت، کوره های پرس، کوره های سینتر و کوره های لعاب است.

کوره پخت (Firing furnace): کوره پخت از مهم ترین تجهیزات لابراتوار دندانپزشکی است. از این کوره برای ساخت قسمت سرامیکی استفاده می شود. این کوره ها به کنترل دقیق دما و سرعت حرارت نیاز دارند و بیشتر تحت خلاء کار می کنند. بنابراین، حفظ شرایط دما و خلاء ضروری است.

کوره پرس (Pressing furnace): عمدتاً برای پرس کردن موادی مانند چینی های قابل پرس و سرامیک استفاده می شود. کوره های پرس علاوه بر داشتن تمامی الزامات کنترلی مشابه کوره های پخت، شامل یک قسمت سخت افزاری و کنترل های پرس نیز است.

کوره سینتر (Sintering furnace): این کوره ها در دمای بسیار بالا تر از کوره های پخت یا پرس معمولی کار می کنند. چنین دما های بالایی را می توان با استفاده از المنت های سرامیکی و قطعات الکترونیکی ویژه بدست آورد.

کوره لعاب (Glazing furnace): کوره لعاب در کلینیک های دندانپزشکی به منظور لعاب دادن سطح پروتز دندان و رفع عیوب جزئی در مدل دندانی استفاده می شود. به نوعی، کوره های لعاب برای تنظیم لکه ها و لعاب های خاصی استفاده می شود که جزئیات محصول نهایی را اضافه می کند تا دقیقا شبیه سایر دندان های بیمار شود.

اجزای کوره دندانسازی

یک کوره معمولی  از سه جزء اصلی تشکیل شده است: (1) محفظه اصلی کوره با در مقاوم و عایق، (2) پنل کنترل کننده الکترونیکی و (3) پمپ خلاء (اگر در حین کار جهت جلوگیری از اکسید شدن نیاز به خلا داشتید). محفظه اصلی را می توان تا 1200 درجه سانتی گراد با استفاده از یک المنت مقاوم گرم کرد. با استفاده از اکسید های زیرکونیوم می توان حداکثر دمای 1530 درجه سانتی گراد را نیز تامین کرد. محفظه اصلی به گونه ای طراحی شده است که امکان ایجاد خلاء در داخل آن وجود دارد.


با استفاده از پنل کنترل الکترونیکی و نرم افزار های در ارتباط با آن می توان تمام فرایند از جمله نرخ افزایش دما، مدت زمان حرارت دهی و … را تحت کنترل داشت. کوره دندانسازی مجهز به سیستمی از یک تا چند برنامه قابل تنظیم است. محدوده قابل قبول برای سطح خلا از 22 تا 75 سانتی متر جیوه است. اکثر کوره های دندانسازی جدید دارای کنترل های لمسی، برنامه های از پیش تعیین شده و حتی اتصال به اینترنت هستند.

اهمیت کوره دندانسازی

دندانسازی علمی وسیع، بسیار حساس و کاملا ادامه حیات بشر است. دندان سالم نه تنها جلوه زیبایی به چهره انسان می دهد، بلکه عمل جویدن، بلع و حتی درست صحبت کردن را ممکن می سازد. بنا به هر دلیلی در طول زندگی انسان، ممکن است این دندان ها آسیب ببینند و نیاز به ترمیم و کشیدن داشته باشند. با محض این که یک دندان در دهان دچار مشکل می شود، متوجه می شویم که نبود آن ها چه عواقبی در پی دارد.

سرامیک های دندانی بخشی از سیستم های طراحی شده برای استفاده به عنوان پروتزهای دندانی هستند که جایگزین ساختار های دندانی از دست رفته یا آسیب دیده می شوند. سرامیک ها مواد غیر آلی و غیر فلزی هستند که معمولاً ماهیت سیلیکاتی دارند و از حرارت دادن مواد معدنی خام در دما های بالا تولید می شوند.

سرامیک ها معمولاً شکننده هستند که به این معنی است که مقاومت فشاری بالایی دارند، اما مقاومت کششی پایینی دارند و ممکن است شکسته شوند. سرامیک های دندانی به عنوان مواد ترمیمی، توانایی مقاومت در برابر نیرو های عملکردی که در حفره دهان در حین جویدن غذا و سایر اقدامات از این قبیل ایجاد می شوند را ندارند. بنابراین، این مواد باید قبل از استفاده سفت و محکم شوند. با ترکیب سرامیک های فلزی هر دو ویژگی زیبایی شناختی سرامیک ها هم مقاومت مکانیکی فلزات را در محصول نهایی خواهیم داشت. مجموع این دو مواد اولیه دندان سازی را تشکیل می دهند.


دندان ساز ها با استفاده از مواد اولیه سرامیک مانند و موم ها، روکش ها و دندان هایی برای افرادی که دندان خود را از دست داده اند می سازند. کوره های دندانسازی اولین و مهم ترین ابزار لابراتوار های دندانسازی است. دندان ساز مواد اولیه مورد نیاز برای ساخت دندان، تاج و بریج ها را داخل کوره دندانسازی قرار می دهد و سپس به ساخت و پردازش شکل نهایی دندان می پردازد. این عمل بسیار ظریف است. کوچک ترین اشتباه در ایجاد شیار ها و اندازه ها، بیمار را با مشکل مواجه می کند.

نکاتی که باید هنگام انتخاب کوره های دندانسازی در نظر گرفت

هنگامی که قصد خرید کوره دندانسازی را دارید، مطمئن شوید که کوره ای را انتخاب کرده اید که قادر به پردازش موادی است که در مطب یا آزمایشگاه خود استفاده می کنید. اطمینان حاصل کنید که کوره ‌مورد نظر به راحتی تمیز می ‌شود.

تغییر در ثبت علایم تجاری

تغییرات مربوط به علایم تجاری یا طبقه کالا یا صاحب علامت و همچنین تغییرات مربوط به نشانی و تابعیت و نماینده قانونی صاحب علامت در ایران رسمیت نخواهد داشت و حمایت نخواهد شد مگر اینکه در ایران به ثبت برسد. اخذ کارت بازرگانی فوری به موجب ماده 138 آیین نامه اجرایی قانون مذکور، مالک علامت مکلف است هر نوع تغییر راجع به نام، نشانی، تابعیت و اقامتگاه یا اعطاء اجازه بهره برداری از علامت یا انتقال و یا اعراض از علامت ثبت شده را به مرجع ثبت اعلام نماید. اعمال این تغییرات با رعایت مقررات قانون و آیین نامه اجرایی آن خواهد بود. چنانچه در طبقه بندی بین المللی علامت ثبت شده، تغییراتی به وجود آید مالک علامت می تواند از مرجع ثبت درخواست کند که تغییرات مذکور در گواهینامه علامت اعمال شود.

هرگونه تغییر در مالکیت ثبت علامت جمعی یا تغییر در اظهارنامه ثبت علامت جمعی منوط به اجاره قبلی رئیس سازمان ثبت اسناد و املاک  کشور می  باشد. تغییر در مالکیت ثبت علامت فردی یا جمعی در صورتی که در مواردی مانند ماهیت، مبدا، مراحل ساخت، خصوصیات یا تناسب با هدف کالاها یا خدمات، سبب گمراهی یا فریب عمومی شود معتبر نیست.

چنانچه در زمان تمدید ثبت، تغییری در علامت داده شود، مقررات مربوط به تغییرات از هر حیث باید کاملاً رعایت گردد. هر گاه مدت اعتبار علامت منقضی شده باشد، ثبت آن از طرف صاحب علامت یا دیگران، تابع کلیه مقررات و تشریفات مربوط به ثبت علایم خواهد بود. اشخاص ذی نفع می توانند در ظرف سی روز از تاریخ نشر آگهی مربوط، اعتراض خود را تسلیم نمایند.

ضمایم فرم تغییر نشانی مالک علامت:

  1. اصل آخرین گواهی معتبر ثبت علامت تجاری
  2. کپی شناسنامه و کارت ملی دارندگان حق امضاء برای اشخاص حقوقی طبق آخرین روزنامه رسمی
  3. کپی آخرین روزنامه رسمی شخص حقوقی (شرکت یا موسسه و...) مبنی بر معرفی اعضا هیئت مدیران و دارندگان و دارنده حق امضاء مجاز
  4. وکالتنامه در صورتی که تقاضا توسط وکیل به عمل آمده باشد.
  5. معرفی نامه نماینده شخص حقوقی در صورتی که تقاضا توسط ایشان تسلیم شده باشد.
  6. رسید پرداخت هزینه های قانونی

ضمایم تغییر نام مالک علامت تجاری

  1. اصل یا کپی آخرین گواهی ثبت علامت تجاری
  2. مدارک مثبت هویت متقاضی (کپی شناسنامه،کپی کارت ملی و صفحه توضیحات)
  3. وکالتنامه در صورتی که تقاضا توسط وکیل به عمل آمده باشد.
  4. رسید پرداخت هزینه های قانونی

تغییرات مربوط به نشانی و نام مرکز صاحب علامت و یا مربوط به نشانی نماینده قانونی او در ایران، نیاز به آگهی ندارد. ولی تغییرات دیگر مربوط به صاحب علامت یا نماینده قانونی او و نیز تغییرات مربوط به علامت تجارتی و طبقه کالا، باید به هزینه صاحب علامت در روزنامه رسمی منتشر شود.

https://danasabt.ir/

به موجب ماده 146، کلیه تغییرات و انتقالات یا فسخ و خاتمه و یا اعراض از علامت ثبت شده در صفحه مخصوص مربوط به ثبت علامت، ثبت و در ظهر گواهی نامه علامت درج می گردد و جز در مورد تغییر نشانی، به هزینه ذی نفع ظرف 30 روز از تاریخ ثبت در روزنامه رسمی آگهی می شود. موارد مذکور تا زمانی که به ثبت نرسیده اند در مقابل اشخاص ثالث قابل استناد نمی باشد. ثبت آن ها منوط به پرداخت هزینه های مقرر در جدول هزینه ها و در صورت لزوم هزینه انتشار آگهی مربوط خواهد بود.

استاندارد های اتوکلاو

اتوکلاو، روشی برای استریل کردن

استفاده از گرمای مرطوب کشتن همه میکروارگانیسم ها از جمله اندوسپور های مقاوم در برابر حرارت را تسهیل می کند. کوره ازمایشگاهی   این روش میکروب زدایی با گرم کردن مواد داخل دستگاه در دمای بالاتر از نقطه جوش آب انجام می شود. با توجه به قوانین گاز ها، با افزایش فشار داخل دستگاه می توان به این امر دست یافت.

 می توانید تمامی این شرایط را برای ضد عفونی فراهم کند. انتخاب اتوکلاو استاندارد متناسب با کاربرد و ویژگی هایی که در نظر دارید بسیار مهم است.

به مطالعه این مقاله ادامه دهید تا اطلاعات مفیدی برای خرید اتوکلاو مناسب به دست آورید.

استاندارد های اتوکلاو شامل چه مواردی است؟  


مطابق سند استاندارد ملی به شماره 4583 اتوکلاو که برای ضد عفونی تجهیزات، مواد و ابزار ها به کار می رود باید در مواد مورد استفاده، محفظه اتوکلاو، نحوه ساخت، مولد های بخار، کنترلر های شرایط محیط داخل اتوکلاو و ساختمان دستگاه استاندارد باشند. این که هر کدام از قسمت ها باید دارای چه ویژگی هایی باشند، مورد بحث این مقاله است.

جنس مواد به کار رفته برای ساخت اتوکلاو

انتخاب مواد برای ساخت قسمت های مختلف ظروف تحت فشار و سایر قسمت ها، باید با توجه به مناسب بودن مواد برای شرایط نهایی کاری و ساخت صورت گیرد . تأثیرات خورندگی گالوانیک و اختلاف انبساط باید هنگام استفاده از فلزات غیر مشابه که در تماس با یکدیگر قرارمی‏گیرند و نیز حساسیت برخی از فولاد های ضد زنگ نسبت به فشار و خوردگی شکافی، مورد توجه قرارگیرد .

در جدول زیر جنس فلزاتی که می توان در ساخت اتوکلاو به کار برد به همراه نحوه اتصالات هر کدام آمده است:

محفظهاتصالات
فولاد ضد زنگفولاد ضد زنگ از نوع جنس مشابه محفظه
فولاد کربن دار با روکش فولاد ضد زنگفولاد ضد زنگ از نوع جنس مشابه روکش محفظه
فولاد کربن دار با روکش نیکلنیکل یا آلیاژ مس- نیکل
فولاد کربن دارفولاد کربن دار از نوع جنس مشابه محفظه
آلیاژ مس- نیکلآلیاژ مس- نیکل از نوع جنس مشابه محفظه
مسمفرغ
آلومینیومآلومینیوم

سازنده باید مقاومت طراحی نامی اتوکلاو را روی سطح خارجی اتوکلاو علامت گذاری کند . مقاومت طراحی نامی هر ماده بکار رفته در ساخت پوسته و دو سر محفظه اتوکلاو و مولد بخار , شامل در و قاب باید در مدارک همراه ذکر شود .

محفظه اتوکلاو

اتوکلاو ها بر اساس نوعی که دارند می توانند از در قسمت جلو یا بالا داشته باشند. محفظه اصلی داخلی اتوکلاو باید فضایی مناسب جهت قرار دادن مواد و تجهیزات داشته باشد. طراحی آن به گونه ‏ای باشد که مایعات حاصل از بخار بتوانند تخلیه شده و بخار در تمام قسمت ها گردش کند .

اتوکلاو هایی که دارای فضای نگه داری عمودی، تنها مجاز به داشتن یک در از بالا هستند. توصیه می ‏شود که تنها یک در روی اتوکلاو تعبیه شود , مگر در موارد استثنایی که استفاده از دو در مجاز است. یعنی در مواردی که از یک در برای قرار دادن مواد و وسایل آلوده و از در دیگر برای خارج کردن تجهیزات ضدعفونی شده استفاده می‏ شود .

مولد های بخار

مولد های بخار باید بگونه ای طراحی و نصب شوند که به راحتی بتوان آن ها را بررسی و تمیز کرد. برای ایجاد ارتباط بین مولد بخار و محفظه اصلی اتوکلاو، باید از لوله های مسی و اتصالات مناسب کاربری این دستگاه استفاده شود.

ضخامت و مقاومت دیواره ها

مطابق استاندارد 4583،  مقادیر تنش طراحی برای مواد اولیه مورد استفاده، در دمای طراحی، نباید از مقادیر مقاومت طراحی نامی بیشتر شود .

ضخامت دیواره ها برای هر کدام از مواد اولیه ای که می توانند مورد استفاده قرار گیرند در جدول زیر آورده شده است:

جنسحداقل ضخامت (mm)حداکثر ضخامت (mm)
فولاد کربن دار4.7516
فولاد ضد زنگ1.6525
آلیاژ آلومینیوم2.0040
مس2 یا قطر محفظه×1.50 (هرکدام بیشتر است)10

محفظه های تحت فشار داخلی می توانند به شکل مستطیل یا استوانه باشند.

الزامات اخذ رتبه پیمانکاری

رتبه بندی شرکت های پیمانکاری، بررسی میزان توانایی شرکت است که بر اساس ضوابط و آیین نامه هایی که توسط معاونت راهبردی نهاد ریاست جمهوری مصوب می شود انجام می گیرد.پلمپ دفاتر1403  در این مقاله الزام اخذ رتبه پیمانکاری را بررسی می کنیم.

شرکت های پیمانکاری با توجه به قراردادها و امکانات و وافراد امتیاز آور از 1 تا 5 رتبه بندی می شوند  که در واقع 5 پایین ترین و 1 بالاترین رتبه محسوب می شود. پس از ثبت شرکت و اخذ رتبه، شرکت های پیمانکاری می توانند برای ارتقاء رتبه خود اقدام نمایند. برای ارتقا رتبه از 5 به 1 در شرکت های پیمانکاری مبلغ ریالی پروژه های انجام شده در 15 سال اخیر توسط شرکت و نیروی فنی و مهندسی شرکت ارزیابی می گردد و در صورتی که شرکت امتیاز مورد نظر را کسب کند و اظهارنامه مالیاتی واجد شرایط را داشته باشد در آن صورت می تواند رتبه خود را از 5 به رتبه های بالاتر ارتقاء دهد.

برای رتبه بندی شرکت های پیمانکار ملاک اصلی تعداد نیروی فنی و مهندسی حاضر در هیئت مدیره ی یک شرکت و سوابق و تجربه ی کاری آن ها است.
معاونت راهبردی نهاد ریاست جمهوری، شرکت ها را در 11 رشته مختلف رتبه بندی می کند که عبارتند از:

  1. ساختمان و ابنیه
  2. راه و ترابری
  3. صنعت و معدن
  4. تاسیسات و تجهیزات
  5. کشاورزی
  6. آب
  7. مرمت آثار باستانی
  8. کاوش های زمینی
  9. ارتباطات
  10. نفت و گاز
  11. نیرو

متقاضیان رتبه بندی شرکت های پیمانکاری می  بایست برای اخذ رتبه با ورود به سامانه ساجات به نشانی https://sajat.mporg.ir/profiling/login مدارک مورد نیاز را آماده و در این سامانه ثبت نام نمایند.
چنانچه قبلاَ در این سامانه عضو نبوده اید باید یک کاربر جدید ایجاد نمایید. پس از ثبت نام می توان با وارد نمودن شناسه کاربری و گذرواژه که به آدرس ایمیل یا دامنه ir ارسال شده است وارد سامانه تکمیل ثبت نام ساجات شوید. رتبه بندی شرکت در سامانه ساجات با توجه به اطلاعات و مستنداتی که وارد سامانه شده تشخیص داده خواهد شد.

نحوه پیگیری:
با توجه به امکانات ایجاد شده در سامانه جامع ساجات، حضور نماینده شرکت در محل تشخیص صلاحیت ضرورت ندارد و در موارد ضروری از مدیر عامل و یا یکی از اعضای هیات مدیره شرکت دعوت بعمل خواهد آمد.

الزام اخذ رتبه پیمانکار

1-پیمانکار موظف به رعایت مقررات حفاظت فنی و بهداشت کار است. پیمانکار قبل از شروع کار، ضوابط ویژه کارفرما را برای کار در کارگاه از کارفرما درخواست می کند و پس از دریافت آن ها و هماهنگی های لازم و تایید نهایی کارفرما، پیمانکار باید از آن پس، به آن ها عمل نماید.به هر حال پیمانکار موظف است همیشه اصول و مقررات متعارف را رعایت کند.

2-پیمانکار موظف است عملیات تجهیز کارگاه را،در مدت زمان تعیین شده برای تجهیز کارگاه و همچنین شرایط منطقه، در حد متعارف به انجام برساند. در مواردی که مشخصات فنی اجرایی ویژه ای، برای عملیات تجهیز و برچیدن کارگاه در اسناد و مدارک پیمان درج شده باشد، پیمانکار ملزم به رعایت آن است.

3-حفاظت  فیزیکی از کارها از جمله شامل نحوه حصارکشی، روشنایی، آتش نشانی، حراست و حفاظت از مصالح، تجهیزات و ماشین آلات ساختمانی

4-پیمانکار موظف است بی درنگ پس از تحویل کارگاه، با توجه به فهرست تعیین شده برای تجهیز، طرح جانمایی تجهیز کارگاه را تهیه کرده و پس از تایید مهندس مشاور،آن را مبنای تجهیز کارگاه قرار دهد.

5-کارفرما بر طبق الزامات رتبه بندی شرکت ساجات با توجه به روش پیش بینی شده در اسناد و مدارک پیمان برای تامین آب، برق، گاز و مخابرات، پیمانکار را به دستگاه های اجرایی و سازمان های دولتی برای گرفتن انشعاب آب، برق، گاز و تلفن و یا گرفتن مجوز احداث چاه عمیق یا نیمه عمیق و موارد مشابه برای استفاده موقت در دوره ساختمان، معرفی می کند.

6-پیمانکار بر طبق الزامات رتبه بندی شرکت، موظف است به هزینه خود، ساختمان ها و تاسیسات موقت کارگاه را که برای تجهیز کارگاه احداث می کند در برابر حوادث اتفاقی، مانند آتش سوزی و سیل بیمه کند.

مدارک عمومی لازم جهت اخذ رتبه ی  1 الی 4 پیمانکاری

1-کپی برابر اصل شده ی مدارک ثبتی شرکت
2-مدارک ثبتی شرکت سهامی خاص شامل اساسنامه-اظهارنامه-روزنامه ی رسمی-تاسیس و تغییرات
3-مدارک ثبتی شرکت با مسئولیت محدود شامل اساسنامه-تقاضانامه-شرکت نامه-روزنامه ی رسمی-تاسیس و تغییرات
4-کپی شناسنامه ی کلیه ی سهامداران و اعضای هیئت مدیره و کپی کارت ملی آن ها
5-کپی برابر اصل شده ی مدارک تحصیلی اعضای امتیازآور شرکت
6-تصاویر کلیه ی موافقتنامه ها
7-تهیه ی سربرگ شرکت در سه نسخه
8-اظهارنامه ی مالیاتی شرکت مربوط به آخرین سال مالی قبل از تشکیل پرونده که به تایید و مهر سر ممیز مالیاتی مربوط رسیده باشد.

مدارک لازم جهت اخذ رتبه ی 5 پیمانکاری

1-کپی برابر اصل شده ی مدارک ثبتی شرکت

https://danasabt.ir/2023/09/17/%D8%A7%D8%AE%D8%B0-%DA%A9%D8%A7%D8%B1%D8%AA-%D8%A8%D8%A7%D8%B2%D8%B1%DA%AF%D8%A7%D9%86%DB%8C-%D9%81%D9%88%D8%B1%DB%8C/

2-مدارک ثبتی شرکت سهامی خاص شامل اساسنامه، اظهارنامه، روزنامه ی رسمی، تاسیس و تغییرات
3-مدارک ثبتی شرکت با مسئولیت محدود شامل اساسنامه، تقاضانامه، شرکت نامه، روزنامه ی رسمی، تاسیس و تغییرات
4-ارائه اصل سند مالکیت یا اجاره نامه ی رسمی از دفتر مرکزی شرکت طبق روزنامه ی رسمی شرکت
5-کپی شناسنامه ی کلیه ی سهامداران و اعضای هیئت مدیره و کپی کارت ملی آن ها
6-کپی برابر اصل شده ی مدارک تحصیلی اعضای امتیاز آور شرکت

الکتروفورز دو بعدی | مفاهیم، روش ها و کاربردها

الکتروفورز دو بعدی

الکتروفورز ژل پلی آکریل آمید دو بعدی و یا  2D-PAGEروشی برای جداسازی مخلوط های پروتئینی پیچیده است. کوره ازمایشگاهی  در نظر بگیرید یک نمونه مجهول با تعداد نامشخصی از تنوع های پروتئینی در اختیار دارد. برای شناسایی پروتئین های نمونه مجهول چاره ای جز استفاده از روش الکتروفورز دو بعدی نخواهید داشت.  این روش جداسازی بسیار ساده و روتین است. تکنیک الکتروفورز دو بعدی به وسیله دو ویژگی مختلف پروتئین یعنی نقطه ایزوالکتریک و وزن مولکولی، طی دو مرحله صورت می گیرد.

منظور از الکتروفورز دو بعدی چیست؟

بعد ها در این تکنیک الکتروفورز ژل دوبعدی پروتئین ها به دو مرحله و دو ویژگی فیزیکی و شیمیایی پروتئین ها اشاره دارند. در بعد اول، پروتئین ها براساس نقطه ایزوالکتریک و در بعد دوم براساس وزن مولکولی نسبی از یکدیگر جدا می شوند.

تفاوت روش های الکتروفورز پروتئین

  • روش SDS-PAGE یک تکنیک جداسازی یک بعدی است و پروتئین ها را بر اساس اندازه جدا می کند.
  • الکتروفورز ژل دو بعدی، پروتئین ها را ابتدا بر اساس نقطه ایزوالکتریک و سپس بر اساس اندازه جدا می کند.

مراحل الکتروفورز دو بعدی پروتئین ها

در الکتروفورز دو بعدی پروتئین ها، ابتدا جداسازی صرفا بر اساس بار الکتریکی در یک میدان الکتریکی انجام می شود. با توجه به این که با یکدیگر متفاوت است، این جداسازی اهمیت پیدا می کند. در مرحله دوم، پروتئین ها یک بار دیگر به وسیله الکتروفورز عمودی تفکیک می شوند، اما این بار بر اساس جرم!

در ادامه، جزییات انجام این روش و مراحل آن ها به صورت کامل بررسی شده اند.

جداسازی پروتئین در بعد اول براساس نقطه ایزوالکتریک

پروتئین ها در مرحله isoelectric focusing (IEF) براساس نقطه ایزوالکترویک از یکدیگر جدا می شوند. نقطه ایزوالکتریک به عنوان pHای تعریف می شود که در آن بار خالص مولکول پروتئین صفر می باشد. در واقع براساس این تعریف اگر pH پروتئین کمتر از نقطه ایزوالکتریک باشد دارای بار مثبت و اگر بیشتر از نقطه ایزوالکتریک باشد دارای بار منفی است.

در این فرآیند مخلوط پروتئین تحت تاثیر میدان الکتریکی اعمال شده و بسته به بارها از هم جدا می ‌شوند. درواقع پروتئین ها براساس بار خود به سمت قطبین حرکت می کنند. پروتئین ها تا رسیدن به pH معادل نقطه ایزوالکتریک خود به حرکت ادامه می دهند. سپس آن ها با رسیدن به آن نقطه متمرکز شده و از مخلوط جدا می‌ شوند.

جداسازی پروتئین ها در بعد دوم براساس جرم مولکولی

پس از جداسازی در بعد اول، جداسازی در بعد دوم به وسیله دستگاه با تکنیک SDS-PAGE و بر اساس وزن مولکولی پروتئین ها صورت می گیرد.

در این تکنیک پروتئین ها به وسیله  SDSدناتوره می شوند و با استفاده از یک عامل کاهنده، مانند DTT پیوندهای دی سولفیدی شکسته و ساختار سوم پروتئین از بین می رود و به ساختاری خطی با بار منفی تبدیل می شود.

رنگ آمیزی و مشاهده پروتئین پس از جداسازی

می توان با نشاندار کردن پروتئین ها به وسیله اسیدهای آمینه نشاندار مانند 3H، 14C یا 35S و رنگ آمیزی آن ها با استفاده از کوماسی بلو، رنگ نقره، رنگ های فلورسنت و یا از طریق تشخیص رادیو ایزوتوپ (فسفرسانس) پروتیئن های جدا شده را مشاهده کرد. با استفاده از تکنیک الکتروفورز دو بعدی و رنگ آمیزی که ذکر شد، پروتئین های مختلف را می توان جدا کرد. در نهایت اطلاعاتی مانند نقطه ایزوالکتریک، وزن مولکولی و مقدار پروتئین را با این روش تعیین می شود.

نامگذاری پروتئین ها براساس باند

نامگذاری پروتئین ها به صورت باند براساس حرکت و جایگاه آن ها توسط دستگاه الکتروفورز و به روش   SDS-PAGE که مخفف Polyacrylamide gel electrophoresis Sodium dodecyl است انجام می شود. در این تکنیک پروتئین ها الکتروفورز شده و براساس اندازه در ژل قرار می گیرند. این نوع تکنیک به دلیل نوع ژل مورد نیاز که پلی آکریل آمید است با دستگاه الکتروفورز عمودی انجام می شود.

مراحل مورد نیاز به منظور نامگذاری پروتئین ها براساس باند

بار الکتریکی و اندازه مولکول ‌ها در جداسازی پروتئین ها به وسیله تکنیک الکتروفورز حائز اهمیت هستند. اگر با تکنیکی بتوانیم بار همه مولکول‌ های پروتئین را یکسان کنیم در این حالت جداسازی تنها براساس اندازه مولکول انجام می گیرد. با این روش فرآیند با دقت بالاتری نسبت به قبل انجام می شود.

در این روش با استفاده از حرارت دادن و اتصال دترجنت آنیونی به نام دودسیل سولفات  SDS که لوریل سولفات نیز نامیده می شود (SDS) به پروتئین‌ ها، بار همه مولکول‌ های پروتئینی منفی می‌ شود. ترکیب SDS به نواحی آبگریز پروتئین ‌ها متصل شده و آن ‌ها را دناتوره  می ‌کند. با این کار، در واقع SDS بار الکتریکی مولکول ‌های پروتئین را می ‌پوشاند و به این ترتیب، سرعت حرکت پروتئین ها تنها به اندازه آن ها بستگی دارد، نه به بار آن ها. بعد از این مرحله، با استفاده از  بستر پلی ‌آکریل آمید، پروتئین ‌ها در طول ماتریکس ژل براساس اندازه‌ شان از هم جدا می‌ شوند.

در تکنیک SDS-PAGE هر پروتئینی که وزنش کمتر باشد راحت تر از منافذ ژل عبور کرده و حرکت بیشتری در ژل خواهد داشت. در انتها هم پس از اتمام ژل، برای ظهور و پیدا شدن باند های پروتئین، رنگ آمیزی ژل اغلب با رنگ کوماسی بلو انجام  می شود.